16s V4区使用的引物为515F和806R，806-515=291，所以测序区域长度约为291bp，除去双端引物（515F：19个碱基，806R：19个碱基）后，剩余V4区长度为250bp左右。经核实，老师的cleandata数据中，拼接后的序列均在253bp左右，没有异常情况。