关于单菌的coreSNP分析，会有客户做此类型分析，频次大概一年两到三次，之前下载过相关软件但流程一直未测通，经过排查问题，解决了相关流程问题，并将该流程测通。

现整理了相关流程步骤如下：

SNP calling，核心SNP(core SNP)聚类分析并建树。

1. 参考基因组序列准备：

由于后续分析涉及bwa软件，bwa只识别以下两种.fasta和.fna后缀的文件名称，所以对参考基因组文件名称有严格要求。

2. 样本基因组序列准备：

配置以样本名制表符样本序列路径的list，可以参考/data/micro/cjw/snippy/TEST/list

注：由于部分软件在TJ集群安装不上，此流程只能在172.17.8.142云平台集群进行分析。

1. 用软件自带的批量运行程序生成脚本并运行：

第一步使用snippy软件生成核心基因组SNP比对文件，生成core.full.aln。

source  /Novomagic/meta/software/abricate/PATH=/Novomagic/meta/software/abricate/conda/bin/activate snippy
snippy-multi list --reference 参考基因组.fna --cpus 16 > run_snp.sh
qsub -cwd -l vf=10g -q all.q run_snp.sh

list 第一列样本名称\t第二列绝对路径

2. 处理特殊字符：

第二步使用snippy-clean_full_aln删除比对文件中所有奇怪的字符并替换为N。

snippy-clean_full_aln core.full.aln > clean.full.aln

3. 去除同源重组位点：

第三步使用gubbins软件去除同源重组位点。

run_gubbins.py -p gubbins clean.full.aln

4. snp位点提取：

第四步使用snp-sites从多fasta对齐文件中提取snp位点。

snp-sites -c gubbins.filtered_polymorphic_sites.fasta > clean.core.aln

5. 构建coresnp进化树：

第五步使用FastTree软件构建系统发育树。

FastTree -gtr -nt clean.core.aln > clean.core.tree.newick

完整脚本及测试路径：

/data/micro/cjw/snippy/TEST